Фосфор и фосфорсодержащие вещества
Фосфор находится в организме в форме неорганических фосфатов, в комплексе с липидами (липидный фосфор) и нуклеотидами (кислоторастворимый фосфор). Входит в состав скелета, фосфолипидов мембран, 2,3-дифосфоглицерата (вещества, определяющего способность гемоглобина присоединять кислород), участвует в процессах накопления и освобождения энергии в клетках (в составе АТФ, АДФ, АМФ), в ферментативных реакциях (в составе НАДФ). Поступает с пищей, всасывание …
Унифицированный метод определения фосфора по восстановлению фосфорно-молибденовой гетерополикислоты Принцип метода Белки осаждают трихлоруксусной кислотой, в кислой среде фосфорная кислота образует с молибденовой кислотой фосфорно-молибденовую гетерополикислоту, которая восстанавливается эйконогеном с образованием ярко окрашенного молибденового синего. Необходимые реактивы I. Кислота трихлоруксусная, раствор 100 г/л (10%). II. Кислота серная 5 н. III. Аммоний молибденовокислый, 5%-ный раствор готовят, растворяя …
К 1 мл прибавляют 4 мл воды и 5 мл раствора трихлоруксусной кислоты, через 10 мин центрифугируют или фильтруют. К 5 мл безбелкового фильтрата добавляют 1 мл раствора молибденовокислого аммония, 0,2 мл раствора эйконогена и 1,8 мл воды. Через 20 мин фотометрируют при длине волны 630—690 нм в кюветах с длиной оптического пути 1 см …
Принцип метода Неорганический фосфор образует с молибденовой кислотой фосфорномолибденовую гетерополикислоту, которая, реагируя с основным красителем — малахитовым зеленым, дает зеленовато-синее окрашивание. Если фосфора нет, то малахитовый зеленый в кислой среде окрашен в желто-коричневый цвет. Белок не мешает проведению реакции, поэтому депротеинизацию не проводят, для обеспечения коллоидной устойчивости образовавшегося комплекса в раствор добавляется твин 20. Необходимые …
Унифицированный метод определения фосфора после осаждения белков трихлоруксуснои кислотой Принцип метода. При осаждении белков крови трихлоруксусной кислотой все фосфолипиды осаждаются вместе с белковым сгустком, а неорганический и кислоторастворимый фосфор остаются в растворе. Белковый сгусток минерализуется нагреванием с хлорной кислотой и фосфор определяется эйконогеновым методом. В связи с тем, что белки плазмы не содержат фосфора, весь …
К 0,2 мл исследуемой сыворотки добавляют 3 мл воды и медленно 3 мл 10%-ного раствора трихлоруксусной кислоты, через 1—2 мин центрифугируют, надосадочную жидкость сливают — пробирку переворачивают и дают стечь жидкости. К осадку добавляют 1 мл 57%-ной хлорной кислоты, если ее концентрация ниже, соответственно увеличивают количество кислоты, переносят в колбу или в большую пробирку для …
Принцип метода Белки эритроцитов осаждают трихлоруксусной кислотой, надосадочную жидкость подвергают электрофорезу на бумаге в цитратном буфере рН 5,1. Пятна АТФ и АДФ идентифицируют в ультрафиолетовом свете, вырезают, элюируют и количественно определяют прямой спектрофотометрией в ультрафиолетовом свете при длине волны 260 нм. Необходимые реактивы I. Натрия цитрат трехзамещенный. II. Гепарин, ампулированный препарат, активность 5000 ЕД/мл. III. …
Кровь берут с гепарином из расчета 0,1 мл на 5 мл крови. Эритроциты отделяют центрифугированием, плазму отсасывают, а клетки дважды промывают изотоническим раствором натрия хлорида при температуре 4 °С, каждый раз центрифугируя, отсасывая надосадочную жидкость и вновь ресуспендируя в новой порции раствора. К 0,5 мл эритроцитной взвеси добавляют 0,5 мл 15%-ной трихлоруксусной кислоты, перемешивают палочкой, …
Принцип метода Белки эритроцитов осаждаются хлорной кислотой, избыток которой удаляется в виде калиевой соли. Безбелковый фильтрат хроматографируется в тонком слое на пластинах «Силуфол», нуклеотиды идентифицируются в ультрафиолетовом свете и определяются по светопоглощению элюатов. Необходимые реактивы I. Диоксан. II. Изопропиловый спирт. III. Аммиак, концентрированный раствор. IV. Кислота хлорная, 0,8 н (8%-ная НСlО4). V. Калия карбонат, раствор …
Кровь берут с гепарином, добавляя его из расчета 12 ME на 1 мл крови. Эритроциты отделяют центрифугированием, плазму отсасывают, а клетки 3 раза промывают холодным изотоническим раствором натрия хлорида, каждый раз центрифугируя по 20 мин при скорости 3000 об./мин. К 1 мл эритроцитной массы добавляют 1 мл раствора хлорной кислоты, перемешивают и через несколько минут …
