Питание и здоровье
Питание и здоровье

Особенности питания различных групп людей

Медицина в фото
Медицина в фото

Уникальные медицинские фото: органы, болезни, паразиты

Планирование беременности и зачатие
Планирование беременности

Рождение ребенка – важный шаг в жизни каждой семьи

Справочник по психиатрии
Справочник по психиатрии

Симптомы, диагноз, развитие, лечение

Главная / Справочник по клинической лабораторной диагностике / Исследование водно-солевого обмена / Фосфор и фосфорсодержащие вещества / Метод определения фосфора по образованию окрашенного комплекса малахитового зеленого с фосфорномолибденовой кислотой

Метод определения фосфора по образованию окрашенного комплекса малахитового зеленого с фосфорномолибденовой кислотой

Принцип метода

Неорганический фосфор образует с молибденовой кислотой фосфорномолибденовую гетерополикислоту, которая, реагируя с основным красителем — малахитовым зеленым, дает зеленовато-синее окрашивание. Если фосфора нет, то малахитовый зеленый в кислой среде окрашен в желто-коричневый цвет. Белок не мешает проведению реакции, поэтому депротеинизацию не проводят, для обеспечения коллоидной устойчивости образовавшегося комплекса в раствор добавляется твин 20.

Необходимые реактивы

I.  Малахитовый зеленый.

II.  Аммоний молибденовокислый.

III.  Цветной реактив — 1,5 г малахитового зеленого растворяют в 250 мл воды, одновременно растворяют 10,3 г молибденовокислого аммония в 250 мл 5 н НСl. Оба раствора смешивают, дают отстояться и фильтруют, за это время цвет реактива меняется.

IV.  Твин 20, 1,5%-ный раствор — 0,15 мл твина 20 разводят 10 мл воды.

V.  Калибровочный раствор. Основной калибровочный раствор, содержащий 50 ммоль/л, готовят, растворяя 702,2 мг однозамещенного кислого фосфата калия КН2РО4, высушенного при температуре 120 °С до постоянной массы, в 1 л воды. Из него готовят калибровочный раствор, содержащий 20 мкмоль/л.

Ход исследования

0,02 мл сыворотки вносят в 1,5 мл воды, к раствору добавляют 2 мл цветного реактива и 1 каплю 1,5%-ного раствора твина. Через 10—15 мин фотометрируют при длине волны 600—650 нм против холостого опыта, который ставят так же, как и основной опыт, но без сыворотки.

Для построения калибровочного графика берут 0,5; 1 и 1,5 мл рабочего калибровочного раствора, т.е. 10; 20 и 30 нмоль фосфора, доводят объем до 1,5 мл, добавляют цветной реактив и раствор твина так же, как в основном опыте. Калибровочная проба, в которую взято 20 нмоль фосфора, по окраске соответствует опытной пробе, у которой взята сыворотка, содержащая фосфор в концентрации 1 ммоль/л. Калибровочные пробы, в которые взято 10 и 30 нмоль, соответствуют сывороткам, содержащим 0,5 и 1,5 ммоль фосфора в 1 л. По этим данным строится калибровочная кривая, которая и используется для расчета.

Далее по теме: