Определение активности γ-глутамилтранспептидазы (ход определения)

Опытная проба: в пробирку вносят 0,5 мл раствора субстрата и помещают в водяную баню при температуре 37 °С, приливают 0,05 мл сыворотки крови, содержимое перемешивают и инкубируют точно 15 мин при температуре 37 °С. Затем прибавляют 3 мл раствора уксусной кислоты и перемешивают. Холостую пробу ставят так же, как опытную, но сыворотку добавляют после инкубации. Измеряют на спектрофотометре при длине волны 410 нм или на ФЭК при длине волны 400—500 нм (фиолетовый или синий светофильтр) в кювете с толщиной слоя в 1 см против холостой пробы. Окраска стабильна в течение нескольких часов.

Расчет активности производят по калибровочной кривой.

Построение калибровочной кривой: из основного калибровочного раствора готовят рабочие растворы, как указано ниже.

Определение активности γ-глутамилтранспептидазы

Номер калибровачного раствора	Калибровочный раствор	Дистиллированная вода мл	Активность γ-ГТФ нмоль/(с^.л)
1	0,25	3,75	417
2	0,50	3,50	833
3	1,00	3,00	1667
4	1,00	1,00	3334
5	1,50	0,50	5001
6	2,00	—	6668

В каждую из 6 пробирок наливают по 0,05 мл рабочих калибровочных растворов № 1—6, прибавляют по 3,5 мл раствора уксусной кислоты, перемешивают и измеряют экстинкцию против раствора уксусной кислоты при тех же условиях, что и опытную пробу. По полученным значениям экстинкции строят калибровочную кривую. Линейность калибровочного графика сохраняется до активности 5000 нмоль/(с^.л).

Клинико-диагностическое значение

Значительное повышение активности ГГТП имеет место при обструктивных поражениях печени, внепеченочной обтурации желчных протоков. Повышение активности возникает при таких заболеваниях печени, как цирроз, гепатит, при инфекционном мононуклеозе, пересадке почки, гипертироидизме, сахарном диабете, панкреатите, алкоголизме, при раке поджелудочной железы, раке предстательной железы, гепатоме.

Далее по теме: