Методы исследования активности лактатдегидрогеназы (ЛДГ)
Лактатдегидрогеназа — гликолитический фермент, обратимо катализирующий окисление L-лактата в пировиноградную кислоту. Для лактатдегидрогеназы в качестве промежуточного акцептора водорода требуется НАД.
Реакция, катализируемая лактатдегидрогеназой, может быть представлена в следующем виде:
L-лакгат + НАД ↔ пируват + НАД Н + Н+.
Фермент широко распространен в организме человека.
По степени убывания активности энзима органы и ткани могут быть расположены в следующем порядке: почки, сердце, скелетные мышцы, поджелудочная железа, селезенка, печень, легкие, сыворотка крови. В последней обнаружено несколько различных белков (изоэнзимов), обладающих каталитическими свойствами этого фермента. Изменения в строении белковой части изофермента обусловливают их различные физико-химические свойства, что, в частности, сказывается в неодинаковой электрофоретической подвижности разновидностей этого фермента в агаровом, крахмальном, полиакриламидном и других гелях.
В сыворотке крови обнаружено пять изоэнзимов лактатдегидрогеназы: ЛДГ1, ЛДГ2, ЛДГ3, ЛДГ4, ЛДГ5, располагающихся в геле в порядке убывания их электрофоретической подвижности. Установлено, что фракция ЛДГ1 происходит в основном из ткани сердца, ЛДГ5 — из печени. В отличие от последней ЛДГ1 обладают большей устойчивостью к действию мочевины.
Лактатдегидрогеназа содержится не только в сыворотке, но и в значительном количестве в эритроцитах, поэтому сыворотка, используемая для анализа, должна быть свежей, лишенной следов гемолиза.
Исследование общей активности фермента характеризует интенсивность окислительно-восстановительных процессов организма, а определение активности отдельных изоэнзимов ЛДГ способствует диагностике некоторых заболеваний сердца, печени и других органов.
Принцип метода
Лактатдегидрогеназа (L-лактат, НАД-оксидоредуктаза) катализирует превращение лактата в пируват при одновременном восстановлении НАД в НАД(Н), который далее восстанавливает в присутствии N-метилфеназонийметилсульфата йоднитротетразолиевый фиолетовый в красный формазан. Одновременно с определением общей каталитической активности лактатдегидрогеназы можно определять и долю фермента, устойчивого к действию мочевины, что характерно главным образом для изофермента сердечной фракции.
Пределы активности:
ЛДГ при температуре 37 °С — 0,66 0—2,66 мккат/л, Доля фермента, устойчивая к действию мочевины (%), — 60—80.
- Методы исследования активности лактатдегидрогеназы (клинико-диагностическое значение)
- Метод исследования активности щелочной фосфатазы (ЩФ)
- Метод исследования активности щелочной фосфатазы (необходимые реактивы)
- Метод исследования активности щелочной фосфатазы (ход определения)
- Метод исследования активности креатинкиназы (КК)
- Метод исследования активности креатинкиназы (необходимые реактивы)
- Метод исследования активности креатинкиназы (ход определения)
- Метод исследования активности креатинкиназы (клинико-диагностическое значение)
- Методы исследования активности лактатдегидрогеназы (необходимые реактивы)
- Методы исследования активности лактатдегидрогеназы (ход определения)
