Метод исследования активности креатинкиназы (ход определения)

Предварительно все растворы реактивов прогревают в течение 5 мин при температуре 37 °С.

Опытная проба: в пробирку вносят 1,5 мл основной смеси реактивов, 0,1 мл раствора цистеина и 0,4 мл сыворотки крови. Содержимое пробирки осторожно перемешивают и ставят в термостат при температуре 37 °С на 30 мин. Затем прибавляют 0,2 мл раствора трихлоруксусной кислоты, перемешивают стеклянной палочкой и центрифугируют при скорости 3000 об./мин в течение 10 мин.

Холостую пробу ставят так же, как опытную, но сыворотку добавляют после прибавления раствора трихлоруксусной кислоты. Из опытной и холостой проб забирают по 1 мл надосадочной жидкости и переносят в химические пробирки (маркированные соответствующим образом), в которых содержится по 2 мл смеси растворов для проведения специфического гидролиза креатинфосфата. Полученную смесь растворов перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 30 мин (время гидролиза креатинфосфата). После этого в пробы добавляют с интервалом в 1 минуту по 0,25 мл раствора эйконогена и точно через 15 мин опытную пробу измеряют против холостой пробы при длине волны 600—700 нм (красный светофильтр) в кювете с толщиной слоя в 0,5 см.

Расчет производят по калибровочному графику. Построение калибровочного графика, готовят калибровочные пробы, как указано ниже.

Исследование активности креатинки

Номер пробирки	Калибровочный раствор (мл)	Дистиллированная вода (мл)	Количество фосфора в пробе (мкг)	Активность КК нмоль/(с∙л)
1	1,0	14,4	1	45
2	1,0	7,7	2	90
3	1,0	5,13	3	135
4	1,0	2,85	4	180
5	1,0	2,08	5	225

Из каждого калибровочного раствора берут по 0,4 мл и обрабатывают, как опытные пробы. В холостую пробу вместо калибровочных растворов берут по 0,4 мл воды.

Далее по теме: