Методы исследования активности ферментов

Ход определения Опытная проба: в пробирки вносят по 1 мл субстратно-буферного раствора, прогревают при температуре 37 °С в течение 5 мин, затем добавляют по 0,1 мл сыворотки. Содержимое пробирок перемешивают и инкубируют в течение 30 мин при температуре 37 °С. После инкубации пробирки переносят в водяную баню со льдом, а затем добавляют по 10 мл …

Опытная проба: в пробирку вносят 0,5 мл раствора субстрата и помещают в водяную баню при температуре 37 °С, приливают 0,05 мл сыворотки крови, содержимое перемешивают и инкубируют точно 15 мин при температуре 37 °С. Затем прибавляют 3 мл раствора уксусной кислоты и перемешивают. Холостую пробу ставят так же, как опытную, но сыворотку добавляют после инкубации. …

Определение активности ферментов наиболее широко используется при диагностике как первичных врожденных ферментопатий, так и вторичных, т.е. развивающихся в результате патологических нарушений на клеточном и субклеточном уровнях. Изменение активности одних и тех же ферментов может наблюдаться при самых различных заболеваниях и, следовательно, не является специфичным для какой-либо патологии. В связи с этим определение активности ферментов имеет …

АЛТ (АлАТ) присутствует в очень больших количествах в печени и почках, в меньших — в скелетных мышцах и сердце. ACT (АсАТ) распределена во всех тканях тела. Наибольшая активность имеется в печени, сердце, скелетных мышцах и эритроцитах. Принцип метода Аспартат-аминотрансфераза катализирует реакцию между L-аспартатом и 2-оксоглутаратом, в результате которой они превращаются в L-глутамат и оксалацетат. Определение …

Необходимые реактивы I.  Калия фосфат однозамещенный (КН2РО4). II.  Калия фосфат двузамещенный (К2НРО4 * 3Н2О). III.  L-аспарагиновая кислота или L-аспарагиновой кислоты натриевая соль. IV.  Фосфатный буфер 0,1 моль/л, рН 7,4: 0,16 г однозамещенного фосфата калия и 2,07 г двузамещенного фосфата калия трехводного растворяют в 40—160 мл воды, проверяют рН и доводят водой в мерной колбе до 100 …

Ход определения Перед определением температура растворов и сыворотки должна быть доведена до температуры измерения. Перед работой можно готовить смесь реактивов, состоящую из субстратно-буферного раствора, раствора НАДН, МДГ и ЛДГ в соотношении 60 : 1 : 1 : 1. Определение проводят по следующей схеме. Перемешивают и через 60 сек. (лаг-фаза) измеряют экстинкцию и одновременно включают секундомер. …

Необходимые реактивы I.  Калия фосфат однозамещенный (КН2РО4). II.  Калия фосфат двузамещенный (К2НРО4 * 3Н2О). III.  Фосфатный буфер, 0,1 моль/л, рН 7,4: 0,16 г однозамещенного фосфата калия и 2,07 г двузамещенного фосфата калия трехводного растворяют в 40—60 мл воды, проверяют рН и доводят водой в мерной колбе до 100 мл. Стабилен при хранении в холодильнике. IV.  L-aльфа-аланин. …

Ход определения Перед определением температура растворов и сыворотки должна быть доведена до температуры измерения. Перед работой можно готовить смесь реактивов, состоящую из субстратно-буферного раствора, раствора НАДН и ЛДГ в соотношении 60 : 1 : 1. Перемешивают, через 60 сек. (лаг-фаза) измеряют экстинкцию и одновременно включают секундомер. Точно через 1, 2, 3 мин (или через более …

Значительное повышение активности АЛТ (в два раза выше нормы и более) развивается при некрозе печеночных клеток любого происхождения, тяжелом шоке, правосердечной недостаточности, острой аноксии, обширной травме печени, левосердечной недостаточности. Подъем активности имеет место также при циррозе печени, механической желтухе, опухоли печени, обширном инфаркте миокарда, миокардите, миозите, мышечной дистрофии. Иногда активность увеличивается при гемолитической болезни, преэклампсии, …

ГГТП катализирует перенос γ-глутамила с глутатиона на аминокислоту или пептид. Фермент занимает важное место в метаболизме аминокислот. В почках фермент играет главную роль в реабсорбции аминокислот из первичной мочи. ГГТП располагается в основном на мембранах клеток, обладающих высокой секреторной активностью — эпителиальных клеток, выстилающих желчные пути, печеночные канальца, проксимальные канальца нефрона, панкреатическая экзокринная ткань, выводные …