Определение активности γ-глутамилтранспептидазы (принцип метода)

γ-глутамилтрансфераза (ГГТ, γ-ГТФ) переносит глутамиловый остаток с γ-L-(+)глутамил-4-нитроанилина на дипептидный акцептор, которым является глицилглицин, служащий одновременно и буфером. Концентрацию освобожденного 4-нитроанилина измеряют фотометрически, после остановки ферментативной реакции подкислением.

Пределы активности:

мужчины — 11—49 Ед/л * 0,017 или 0,19—0,83 мккат/л;
женщины — 7—32 Ед/л * 0,017 или 0,12—0,54 мккат/л.

Необходимые реактивы

I. L-γ-глутамил-n-нитроанилид.

II. Натрия хлорид.

III. Глицилглицин, 0,55 моль/л, рН 8,3: 3,63 г глицилглицина помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доливают до метки водой и растворяют (буферный раствор).

IV. Субстратно-буферный раствор: в пробирку наливают 10 мл воды, добавляют 0,028 г L-γ-глутамил-n-нитроанилида и 0,082 г хлорида натрия и, не переставая мешать, растворяют содержимое пробирки на кипящей водяной бане в течение 60 сек. Затем раствор охлаждают до температуры 37 °С и добавляют 2,5 мл буферного раствора. Приготовленный раствор субстрата во время работы хранят в водяной бане при 37 °С. Неиспользованный раствор субстрата можно хранить в холодильнике в течение недели. Субстрат плохо растворим, и при комнатной температуре выпадает в осадок. Поэтому перед употреблением выкристаллизовавшийся субстрат растворяют нагреванием в кипящей водяной бане. Нагревание и растворение субстрата можно повторить не более 2 раз.

V. Уксусная кислота ледяная, раствор 100 г/л: 10 мл кислоты доводят водой до 100 мл.

VI. Основной калибровочный раствор n-нитроанилина: 0,0829 г n-нитроанилина помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят до метки водой и растворяют. Для определения активности γ-ГТФ можно пользоваться набором реактивов «Лахема».

Далее по теме: