Метод определения активности АЛТ

Необходимые реактивы

I. Калия фосфат однозамещенный (КН₂РО₄).

II. Калия фосфат двузамещенный (К₂НРО₄ * 3Н₂О).

III. Фосфатный буфер, 0,1 моль/л, рН 7,4: 0,16 г однозамещенного фосфата калия и 2,07 г двузамещенного фосфата калия трехводного растворяют в 40—60 мл воды, проверяют рН и доводят водой в мерной колбе до 100 мл. Стабилен при хранении в холодильнике.

IV. L-aльфа-аланин.

V. Субстратно-буферный раствор, 0,63 моль/л L-аланина в 0,1 моль/л фосфатном буфере, рН 7,4: 5,62 г L-аланина растворяют в 80 мл 0,1 моль/л фосфатного буфера, проверяют рН и доводят фосфатным буфером в мерной колбе до 100 мл. Стабилен в течение 2 месяцев при хранении в холодильнике.

VI. β-никотинамидадениндинуклеотид восстановленный, динатриевая соль, 15 ммоль/л (коэффициент молярной экстинкции не ниже 5,6 * 10² м² * моль–1 при 340 нм): 16 мг НАДН * Na₂ 4H₂O растворяют в 1,5 мл воды. Раствор стабилен в течение 2 недель при хранении в темной посуде в холодильнике.

VII. Натр едкий, 5 моль/л.

VIII. α-κетоглутаровая кислота, 0,56 моль/л: 0,245 г α-кетоглутаровой кислоты растворяют в 2,5 мл воды и добавляют 0,5 мл 5 моль/л раствора едкого натра. Если используют динатриевую соль α-кетоглутаровой кислоты, то 0,318 г соли растворяют в 3 мл воды. Раствор стабилен в течение 2 недель при хранении в холодильнике.

IX. Лактатдегидрогеназа из скелетной мышцы кролика или свиньи, суспензия в 50% растворе глицерина. Специфическая каталитическая активность выше 8 ммоль/(с^.л).

Примеси: АсАТ < 0,01%, ГлДГ < 0,003%, АлАТ < 0,01%. Для приготовления рабочего раствора к 45 мкл суспензии добавляют 5 мл воды. Стабилен в течение 3 месяцев при хранении в холодильнике.

X. Натрия хлорид, 154 ммоль/л (физиологический раствор).

Все реактивы лучше готовить на бидистиллированной воде.

Специальное оборудование то же, что для АсАТ.

Далее по теме: