Химическое исследование желчи

Цветная реакция Либермана и Бурхарда

С помощью этого метода производят количественное определение холестерина в желчи. Холестерин в присутствии уксусного ангидрида и смеси уксусной и серной кислот дает зеленое окрашивание.

Для этого используют:

• смесь из 1 части ледяной уксусной кислоты, 5 частей уксусного ангидрида и 1 части концентрированной серной кислоты; смесь должна быть бесцветной или желтоватой; хранят в посуде из темного стекла с притертой пробкой в холодильнике;
  
  
• стандартный раствор холестерина — 1800 мг/л (180 мг холестерина растворяют в 2,5 мл хлороформа в мерной колбе вместимостью 100 мл и доводят до метки абсолютным спиртом); раствор хранят в посуде из темного стекла с притертой пробкой, которую парафинируют; 1 мл раствора содержит 1,8 мг холестерина.

К 2,1 мл смеси реактивов добавляют 0,1 мл исследуемого материала (желчи). Пробирку энергично встряхивают 10—12 раз и ставят в термостат на 10 мин при температуре 37 °С. Измерения производят на ФЭКе против реактива 1 при красном светофильтре (630—690 нм) в кювете с толщиной слоя в 5 мм.

Расчет ведут по калибровочному графику.

Для калибровочного графика готовят из основного стандартного раствора холестерина ряд разведений.

Ряд разведений из основного стандартного раствора холестерина

№ пробирки	Количество стандартного холестерина мл	Количество реактива мл	Количество холестерина в пробе мг	Концентрация холестерина
				мг/л	г/л
1	0,05	2,15	0,09	900	0,9
2	0,10	2,10	0,18	1800	1,8
3	0,15	2,05	0,27	2700	2,7
4	0,20	2,00	0,36	3600	3,6
5	0,25	1,95	0,45	4500	4,5

Рабочие стандартные растворы обрабатывают так же, как опытные пробы.

Известен ряд колориметрических методов на желчные кислоты, в которых используются реакция Петтенкофера и ее модификации, основанные на взаимодействии желчных кислот с сахаром в присутствии серной кислоты. В результате реакции образуется фурфурол и раствор окрашивается в вишнево-красный цвет. Эта реакция специфична для холевой и парных (гликохолевой и таурохолевой) кислот, остальные желчные кислоты не вступают в данную реакцию.

В норме согласно И.А. Скуя:

• в порции А концентрация холестерина составляет 1,3—2,8 ммоль/л (50—110 мг%), холатов — 17,4—52,0 ммоль/л (670—2000 мг%);
  
  
• в порции В концентрация холестерина — 5,2—15,6 ммоль/л (200—600 мг%), холатов — 57,2—184,6 ммоль/л (2200—7100 мг%);
  
  
• в порции С содержание холестерина 1,1—3,1 ммоль/л (45—120 мг%), холатов — 13,0—57,2 ммоль/л (500—2200 мг%).

Приведенные нормативы показывают большие физиологические колебания состава желчи. Н.А. Скуя предлагает считать гиперхолестеринохолией концентрацию холестерина выше 6,5 ммоль/л (250 мг%) в одной или нескольких печеночных (порции А и С) фракциях, а гипохолестеринохолией — концентрацию холестерина менее 2—2,6 ммоль/л (80—100 мг%) во всех печеночных фракциях.

Особое практическое значение имеет холато-холестериновый коэффициент (х/х). У здоровых лиц он обычно выше 10. Снижение х/х коэффициента (менее 10) является индикатором склонности к камнеобразованию в желчевыводящей системе При оценке х/х коэффициента необходимо сопоставлять с данными микроскопического анализа (обнаружения скоплений кристаллов холестерина, аморфных масс билирубината кальция, микролитов).