Определение глюкозы (необходимые реактивы)
Необходимые реактивы
I. Натрия хлорид — 9 г/л (изотонический раствор). Готовят, растворяя 0,9 г NaCl в 100 мл жидкости.
II. Цинка сульфат — 50 г/л, 5 г сульфата цинка (ZnSO4) растворяют в воде, объем доводят до 100 мл.
III. Натр едкий — 0,3 ммоль/л готовят, растворяя в воде, доводят до 100 мл.
IV. Натр едкий — 0,3 ммоль/л готовят, растворяя 1,2 г NaOH в 100 мл воды, концентрацию проверяют титрованием.
V. Ортотолуидина 1%-ный раствор: 1 г препарата растворяют в 100 мл 96° спирта. Раствор можно хранить в холодильнике в склянке с притертой пробкой в течение нескольких месяцев.
VI. Ацетатный буферный раствор pH 4,8: смешивают 4 части 0,25 г уксусной кислоты и 6 частей 0,25%-ного ацетата натрия.
VII. Глюкозооксидаза. Сухой препарат активностью 3000 ЕД/мг или больше.
VIII. Пероксидаза из крови — 1 мл растворяют в 5 мл ацетатного буфера.
IX. Рабочий реактив: в 80 мм ацетатного буфера растворяют 2 мг глюкозооксидазы и 1 мг пероксидазы, прибавляют 1 мл 1%-ного раствора ортотолуидина и доводят объем буферным раствором до 100 мл. Рабочий реактив должен быть прозрачным, бесцветным или иметь слабо-зеленый оттенок, в этом случае он устойчив при хранении на холоде. Если же окраска интенсивная или спустя несколько часов после хранения начинает выпадать осадок, это значит, что ортотолуидин недостаточно чистый и его надо перекристаллизовать.
X. Калибровочные растворы глюкозы. Глюкозу предварительно высушивают при 37 °С и хранят в эксикаторе. Сначала готовят основной раствор с концентрацией 50 ммоль/л, для чего 180 мл вещества растворяют в 20 мл насыщенного раствора 0,3%-ной бензойной кислоты. Из этого раствора готовят рабочие калибровочные растворы, содержащие 3, 6, 9, 12, 15, 18 и 21 ммоль/л. Для этого берут 0,6; 1,2; 1,8; 2,4; 3; 3,6 и 4,2 мл основного раствора и доводят насыщение раствором до 10 мл.
