Железо поступает в организм через желудочно-кишечный тракт, а выводится почти исключительно с калом (конечно, если нет кровотечения или гематурии), поэтому содержание его в моче у здоровых людей очень мало — 0,7—5,7 нмоль/сутки (0,04—0,3 мкг), это количество не может быть уловлено обычными методами. После приема некоторых железосодержащих препаратов или комплексообразователя десферала, который способствует опустошению депо, выведение железа с мочой значительно увеличивается и может быть измерено.
Состояние обмена железа лучше всего характеризует количество негеминового сывороточного железа, т.е. железо трансферрина и ферритина, так как это основной резерв, который используется организмом в случае необходимости. Общее количество трансферрина, связанного с железом и свободного, может быть определено также иммунологическими методами. Определяют количество свободного трансферрина и по его способности связывать радиоактивное железо. Для практических лабораторий, использующих обычные биохимические методы, наибольшее значение имеет определение негеминового железа сыворотки, а также ее железосвязывающей способности, т.е. того максимального количества трехвалентного железа, которое может связаться с белками сыворотки.
Прочность комплекса трансферрин — железо максимальна при рН 7,0 и зависит от природы буферного раствора. При увеличении кислотности, а также восстановлении железа комплекс распадается. Другие соединения, например гемоглобин, в этих условиях не разрушаются или разрушаются лишь незначительно, поэтому кислотноотщепляемое или негеминовое железо лучше других компонентов плазмы характеризует резервы железа в организме. Существует несколько вариантов методов определения негеминового железа, в частности некоторые рекомендуют проводить нагревание на водяной бане для лучшего разрушения комплекса, но при этом всегда существует угроза, что разрушатся и другие железосодержащие соединения, поэтому результаты анализа будут завышенными.
Известно много цветных реактивов как на восстановленное (Fe++), так и на окисленное (Fe+++) железо, лучшие результаты получаются с батофенантролином, который образует наиболее прочный и яркоокрашенный комплекс. Но батофенантролин нерастворим в воде, поэтому его надо предварительно обработать хлорсульфоновой кислотой либо использовать спиртовой раствор. При определении железа после минерализации с серной кислотой надо всегда иметь в виду, что почти неизбежно образующаяся в этих условиях пирофосфорная кислота, связывая железо, мешает проведению цветной реакции, поэтому ее надо разрушать, нагревая на водяной бане слегка разбавленный минерализат.
Условия взятия материала
Определение сывороточного железа обычно проводят для выявления железодефицитного состояния, поэтому, как правило, информативно уменьшение его содержания. Обследуемые по крайней мере в течение 2 недель перед взятием крови не должны получать железосодержащих препаратов. Кровь надо брать широкими иглами. Сыворотка должна быть свободна от видимых следов гемолиза.