Диацетилмонооксимный метод определения мочевины (ход определения мочевины в сыворотке крови)

Editor

15 лет назад

Опытная проба: в центрифужную пробирку наливают 0,8 мл воды, 0,2 мл сыворотки и 1 мл 100 г/л раствора трихлоруксусной кислоты, смешивают. Через 15—20 мин центрифугируют. В чистую пробирку вносят 0,5 мл надосадочной жидкости и 5 мл цветного реактива. Пробирку выдерживают на кипящей водяной бане в течение 20 мин, затем охлаждают в течение 2—3 мин под проточной водой. Измерение проводят на фотометре при длине волны 530—560 нм (зеленый светофильтр) против холостой пробы в кювете с толщиной слоя в 1 см. Холостую пробу ставят так же, как опытную, но вместо надосадочной жидкости берут 0,5 мл воды.

Расчет проводят по формуле путем сравнения с калибровочной пробой. Калибровочную пробу ставят аналогично опытной, но вместо сыворотки берут 0,2 мл калибровочного раствора.

Концентрация мочевины, ммоль/л: Е_оп / Е_к*С_к,

где Е_оп — экстинкция опытной пробы;

Е_к — экстинкция калибровочной пробы;

С_к — концентрация мочевины в калибровочном растворе, 7 ммоль/л.

Определение мочевины в моче проводят аналогично определению мочевины в сыворотке крови, но вместо сыворотки берут 0,2 мл разведенной мочи. Параллельно обрабатывают калибровочную пробу, как описано для определения мочевины в сыворотке крови.

Расчет мочевины на суточное количество мочи производят по следующей формуле: М_сут = С_к*Е_оп*а *К / Е_к*б,

где М_сут — количество мочевины в суточной моче, ммоль;

Е_оп — экстинкция опытной пробы;

Е_к — экстинкция калибровочной пробы;

С_к — содержание мочевины в калибровочном растворе, ммоль;

а — суточное количество мочи, мл;

б — количество мочи, взятое на анализ, мл;

К — коэффициент разведения мочи.

Примечания:

измерение проводят не позже чем через 15 мин после охлаждения проб ввиду неустойчивости окраски.
из-за неустойчивости окрашенного комплекса мочевины с диацетилмонооксимом и зависимости окраски от условий нагревания калибровочную пробу определяют параллельно каждой серии опыта.
при содержании мочевины в сыворотке крови выше 17 ммоль/л сыворотку разводят изотоническим раствором хлорида натрия, а результаты умножают на коэффициент разведения.
для пересчета на азот мочевины результаты следует разделить на 2,14.