Site icon Medkurs.ru

Определение общего белка сыворотки крови биуретовым методом (ход определения)

Опытная проба: к 0,1 мл сыворотки прибавляют 5 мл рабочего раствора биуретового реактива и смешивают, избегая образования пены. Через 30 мин (и не позднее чем через 1 ч) измеряют на фотометре в кювете с толщиной слоя 1 см при длине волны 500—560 нм (зеленый светофильтр) против холостой пробы.

Холостая проба: к 5 мл рабочего биуретового реактива прибавляют 0,1 мл 154 ммоль/л раствора хлорида натрия, далее обрабатывают как опытную пробу.

Расчет ведут по калибровочному графику.

Построение калибровочного графика: из калибровочного раствора готовят рабочие растворы как указано в таблице.

Приготовление калибровочного раствора

Компоненты
Пробы
опытная
холостая
калибровочная
1 10 мл мочи + 100 мг аскорбиновой кислоты 1,5 1,5
2 Реактив Эрлиха 1,5
3 Насыщенный раствор ацетата натрия 3,0
4 Смесь компонентов 2 и 3 в соотношении 1:2 4,5
5 Рабочий калибровочный раствор 6,0

Из каждого разведения берут по 0,1 мл рабочего раствора и прибавляют по 5 мл рабочего биуретового реактива, через 30—60 мин измеряют на фотометре, как в опыте против холостой пробы. По полученным данным строят калибровочный график. Калибровочная кривая линейна до 100 г/л альбумина.

Нормальные величины: 65—85 г/л (6,5—8,5 г на 100 мл).

Exit mobile version