27 апреля 2011

Ученые Киргизии установили: При 8-разовом кормлении снижается количество облигатной микрофлоры кишечника и увеличивается размножение патологических и условно патогенных форм

При дисбиозе кишечника существенно меняется микробный пейзаж внутренней среды кишки, что нарушает пищеварительные процессы, оказывает повреждающее действие на кишечную стенку и усугубляет уже имеющуюся малоабсорбцию.

Нарушенная кишечная микрофлора оказывает негативное воздействие на организм, усиливает кишечное брожение, выработку токсинов, канцерогенов, фенолов, аминов, что влияет на функцию ЖКТ и способствуют развитию различных заболеваний. При этом бактериальному спектру отводится роль не следствия, а причины возникновения системных расстройств [1, 2, 3, 4].

Целью данного исследования явилось изучение качественных и количественных изменений микрофлоры кишечника при различной кратности приема пищи.

Материал и методы исследования

Эксперименты поставлены на 120 белых лабораторных крысах средней массой 200-250 гр., которые были разделены на 3 группы:

I — контрольная группа, животные находящиеся на 3-х разовом стандартном кормлении (n=60);

II — опытная группа, животные находящиеся на 1-разовом кормлении (n=60);

III — опытная группа, животные находящиеся на 8-разовом кормлении (n=60).

Работа с животными велась в соответствии с положениями IVЕвропейской Конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других научных целей (ETS 123, 1986).

Проанализированы результаты бактериологического исследования испражнений,взятых от экспериментальных крыс, без признаков острых кишечных инфекций (ОКИ). Определение количественного и качественного состава кишечной микрофлоры проводили в соответствии с Методическими рекомендациями № 1-11/31, 1986 и информационным письмом «Совершенствование методов диагностики дисбактериозов толстого кишечника» (СП Гос.мед. акад. им. И.И. Мечникова, 2002). Культурально-ферментативные свойства изучали согласно МУ 04-7233 МЗ СССР от 17.12.84 г. и Приказу №535 от 22.04.85 г. с использованием среды СИБ. Для изучения гемолизирующей активности использовали ГМФ-агар с добавлением 5-процентных эритроцитов барана.

Секционный материал массой не менее 20 г растирали в ступках. При посеве на плотные среды исследуемый материал наносили с помощью пипетки, с последующим втиранием материала шпателем по всей поверхности среды. На высоко селективные среды посевной материал вносили в большом объеме (в 3-5 раз), чем на слабо селективные. Пластинчатые среды подсушивали так, чтобы на их поверхности не оставалась конденсационная жидкость, что обеспечивало рост изолированных колоний. После инкубирования посевов на средах обогащения делался повторный высев на дифференциально-диагностические среды с последующим отбором подозрительных колоний. После 18-20 часового инкубирования чашек с дифференциально-диагностическими средами (висмут-сульфит агар 48 час.) производился учет характера роста с отбором 3-5 подозрительных колоний на одну из сред для первичной идентификации (Клиглера, Ресселя, Олькеницкого) и на скошенный питательный агар. Для идентификации вида микроорганизмов определялись морфологические и биохимические свойства, с использованием соответствующих индиакторных тестов.

Полученный фактический материал подвергли компьютерной обработке с помощью пакета прикладных программ MicrosoftExcel с расчетом критерия Стьюдента.

Результаты исследования и их обсуждение

Количество микроорганизмов — представители облигатной микрофлоры толстого и тонкого кишечника обнаружено в большом количеcтве, (соответствующих нормативным показателям) при 3-разовом кормлении: (4,3х10⁶; 5,7х10⁶) их количество было меньше в группе с одноразовым питанием (7,4х10; 8,7х10) и наоболее низким в группе восьми кратным приемом пищи (2,86х10; и 5,71х10). Ферментативная активность кишечной палочки сохранена (ферментативная активность определена с помощью дифференциально-диагностической среды Эндо, среды первичной идентификации — среды Клиглера и короткого ряда Гисса и СИБ). В желудке в контрольной и опытной группах микроорганизмы не обнаружены.

Среда Блаурокка, рост бифидобактерий с изменением прозрачности среды при внесении содержимого толстого кишечника крыс с одноразовым кормление

Рис. 1.

Во второй группе с 1-разовым кормлением в среднем количество кишечной палочки составило 5х10⁵— 6х10⁵. Отсутствовала условно-патогенная флора, вследствие бактерицидного действия кишечной палочки, определялись бифидо- и лактобактерии в количестве 10-100 кл/г (рис 1).

Среда Сабуро, рост колоний Candida при внесении содержимого толстого кишечника крыс с одноразовым кормлением

Рис. 2.

Обнаружение небольшого количества Candida, в пределах 1000 микробных клеток (рис. 2) указывало на некоторое ингибирование ферментативной активности нормальной облигатной микрофлоры кишечника.

В третьей группе с восьмиразовым кормлении наблюдалась общая тенденция к снижению количества облигатной микрофлоры кишечника, по совокупности всех ее представителей. Так например, количество кишечной палочки снижено до 1000 кл/г. Нет бифидо- и лактобактерий, за счет снижения количества кишечной палочки. При дефиците защитных компонентов кишечной микрофлоры происходит размножение таких патологических видов, как плазмокоагулирующих стафилококков, протеев, грибов рода Кандида, повышено количество условно-патогенных энтеробактерий: Klebsiellaspp, Citrobacterspp, Enterobacterspp, Proteusspp. (рис. 3) в количестве от 100-1000 кл/г.

Рост колоний Klebsiellaна среде Эндо при внесении содержимого толстого кишечника крыс с восьмиразовым кормления

Рис. 3.

Среди атипичных разновидностей эшерихийгемолитическиеE.coli встречались чаще лактозонегетивных. При исследовании испражнений 3-ей группы экспериментальных крыс патогенной флоры (шигеллы и сальмонеллы) не обнаружено.

Выводы

При сравнении групп, различающихся кратностью питания, установлено, что наиболее благоприятные содержание микрофлоры тонкого кишечника было при 3-х разовом питании, несколько снижино при — 1 кратном и наиболее худшее состояние регистрировалось при 8 кратной дачи корма.
Во второй группе с одноразовым кормлением в среднем количество кишечной палочки составляло 5х10⁵— 6х10⁵. Определяются бифидо- и лактобактерии в количестве от 10-100 кл/г. и грибки рода Candida, в пределах 1000 микробных клеток. Отсутствует условно-патогенная флоры за счет бактерицидного действия кишечной палочки.
В третьей группе с восьмиразовым кормлением наблюдалось снижение количества облигатной микрофлоры кишечника, по совокупности всех ее представителей. Отсутствовали бифидо- и лактобактреии. Происходило размножение патогенной микрофлоры плазмокоагулирующих стафилококков, протеев, грибов рода Кандида, количество условно-патогенных энтеробактерий (Klebsiellaspp, Citrobacterspp, Enterobacterspp,Proteusspp.).

Литература:

1. Усманова М.В. Значение комплексных исследований содержимого кишечника для совершенствования лабораторной диагностики энтеропатологий у подростков: Автореф. дис. … канд. мед.наук. — Алматы, 2004. — 31 с.
2. Парфенов А.И. Микробная флора кишечника и дисбактериоз // Русский медицинский журнал. — 1998. — №18. — С. 12-27.
3. Steven R. Metagenomic Analysis of the Human Distal Gut Microbiome // Science. — 2006. — Vol. 312. — P. 1355-1359.
4. Шульпекова Ю.О. Избыточный бактериальный рост в кишечнике: патогенетические особенности и лечебные подходы // Русский медицинский журнал. — 2003. — №5. — С. 557-562.

Авторы: Мохаммад Валид Зиб, Тухватшин Р. Р
Кыргызская государственная медицинская
академия им. И. К. Ахунбаева,
Кыргызстан, г. Бишкек

Далее по теме: