Определение белка
Определение белка осуществляется унифицированным методом с сульфациловой кислотой и на биохимическом анализаторе.
Нормальное содержание белка в спинномозговой жидкости варьирует в пределах:
-
при поясничной пункции — 0,22—0,33 г/л;
-
при цистериальной пункции — 0,1—0,22 г/л;
-
при вентрикулярной пункции — 0,12—0,2 г/л.
Унифицированный метод определения белка с сульфациловой кислотой и сульфатом натрия. Интенсивность получения при коагуляции белка сульфациловой кислотой пропорциональна его концентрации.
Необходимые реактивы
I. 6%-ный раствор сульфациловой кислоты.
II. 14%-ный раствор безводного сульфата натрия.
III. Стандартный раствор альбумина — 1%-ный раствор: 1,0 мл альбумина (из человеческой или бычьей сыворотки) растворяют в небольшом количестве 0,9%-ного раствора хлорида натрия в мерной колбе вместимостью 100 мл и доводят объем раствором хлорида натрия до метки. Реактив нестойкий. Для стабилизации к стандартному раствору прибавляют 1 мл 5%-ного раствора азидида натрия. В этом случае при хранении в холодильнике реактив годен к употреблению в течение 2 месяцев.
IV. 1 мл раствора альбумина.
V. 0,9%-ный раствор хлорида натрия.
Специальное оборудование: фотоэлектроколориметр.
Для анализа применяют свежеприготовленную смесь равных объемов 6%-ного раствора сульфациловой кислоты и 14%-ного раствора безводного сульфата натрия (рабочий раствор). В пробирку наливают 5 мл свежеприготовленного рабочего раствора и 0,5 мл ликвора. Тщательно перемешивают. Через 10 мин интенсивность помутнения измеряют на фотоэлектроколориметре в кювете с длиной оптического пути 1 см против контроля, длина волны 410—480 нм (сине-фиолетовый светофильтр). В контроль вместо реактива берут 0,9%-ный раствор хлорида натрия. Расчет ведут по калибровочному графику.
Построение калибровочного графика: из стандартного раствора готовят разведения и обрабатывают их, как опыт. В 5 пробирок наливают 0,1; 0,2; 0,5 и 1 мл стандартного раствора альбумина и в каждую из них доливают до объема 10 мл 0,9%-ного раствора хлорида натрия. Концентрация белка в этих растворах соответственно 0,05, 0,1, 0,2, 0,5 и 1,0 г/л.
Примечания
I. Если муть начинает оседать, перед измерением пробирку необходимо встряхнуть.
II. Перед определением целесообразно поставить реакцию Панди, и если результат реакции оценивают — 3+ или 4+, то перед началом количественного исследования ликвор надо развести изотоническим раствором хлорида натрия и при расчете учесть степень разведения.
III. Прямолинейная зависимость при построении калибровочного графика сохраняется до 1 г/л, поэтому при более высоких концентрациях белка ликвор следует разводить.
Повышенное содержание белка отмечают при нарушении гемодинамики, воспалительных процессах, органических поражениях центральной нервной системы и оболочек мозга, при экстрамедуллярных опухолях спинного мозга. Пониженное содержание белка отмечается при гидроцефалии и повышенном образовании ликвора.
Большое практическое значение придается определению белкового индекса, отношению глобулинов к альбуминам. Белковые фракции определяются методом электрофореза.
